| 초록 |
원핵세포를 통한 진핵세포 재조합 단백질의 세포내 과발현(overexpression)은inclusion body(내포체)의 형성을 동반한다. 이 같은 내포체는 대개 insoluble form으로 많은 양의 재조합 단백질을 포함하고 있으며 세포질과는 확연히 구분이 되는 부정형의 응집된 형태로 발현된다[1]. 내포체의 형태로 발현된 재조합 단백질을 생물학적 활성을 가진native protein으로 재생하는 공정은 단백질의 종류에 따라 상이하므로 실험적으로 결정, 개발되어야 한다[2,3]. 인 성장호르몬은 뇌하수체 전엽에서 분비되는 191개의 아미노산으로구성된 단일 사슬을 이루고 있는 분자량 22k Da의 펩타이드 호르몬으로 세포크기의 증가,세포 분열의 촉진에 의한 체세포 성장과 연골 성장및 혈당 조절, 지방 분해작용, 단백질의합성 촉진 및 세포질 내의 전해질 대사 작용 등 직접 세포 대사에 관여하는 것으로 알려져 있다. 본 실험에서는 E. coli 내에 내포체의 형태로 발현된 재조합 인 성장호르몬(r-hGH)을 대상으로 기존의 재접힘(refolding) 공정을 도입하여, 내포체의 용해에 사용되는 용해제의 성능 비교와 최적의 pH, 농도를 분석해 보았고, correct folding을 얻기 위한효과적인 용해제의 제거 공정과 공정 평가를 하였다. 또한 재접힘 공정의 주요 변수인 단백질의 농도와 이온 강도의 영향을 분석하였고 재접힘 첨가제로 PEG(polyethyleneglycol) 및 Tween의 효과도 알아보았다.
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