| 초록 |
공초점 형광현미경은 세포 등의 미세한 상태 변화 측정이 가능한 장비이다. Apoptosis란 세포내의 유전자에 의해 제어되는 세포 괴사 프로그램이다. 본 연구에서는 공초점 현광현미경을 이용하여 특정한 약물에 의해서 발생되는 세포의 apoptosis 현상을 실시간으로 측정하였다. 대상 세포는 유방암세포인 MCF-7와 macrophage인 RAW-264.7을, apoptosis 유도 약물은 staurosporine을 사용하였다. Apoptosis 관측 시 staurosporine 외 다른 인자들을 배제하기 위하여 세포 배양 조건을 일정하게 유지하였다. 이러한 세포 배양 조건은 DMEM(10% FBS, 100 IU/I PS)배지와 5%농도의 CO2를 지속적으로 공급하며, 37℃의 온도를 유지시킬 수 있는 특정 chamber를 이용하였다. Apoptosis관찰은 세포에 GFP를 발현시킬 수 있는 pCaspase3-sensor를 이용하였다. 이는 apoptosis가 일어나면 caspase-3가 활성화되어 GFP발현 위치를 세포질에서 핵 안으로 옮겨가는 원리를 이용한 것이다. 또한 apoptosis를 1.5 μM PI와 0.1 μM YO-PRO를 이용하여 apoptosis에 따른 형광변화를 측정하였다. 그리하여 실제 staurosporine을 처리한 후 apoptosis의 일어나는 시간과 세포 모습의 변화를 관찰하였다. Staurosporine을 농도별로 주입하여 apoptosis의 kinetic을 확인하였으며, 또한 이에 따른 형광 이미지의 변화를 실시간으로 관측하였다. 미세 세포배양은 마이크로 바이오칩에 옮겨 세포의 이미지 및 apoptosis의 현상을 관측할 수 있다. |
