| 초록 |
Apoptosis란 세포내의 유전자에 의해 제어되어 죽는 프로그램을 말하며, necrosis는 외부로부터의 스트레스에 의해 세포가 죽는 것을 말한다. 본 연구에서는 공초점 형광 현미경을 이용하여 신경 조세포인 C6 cell line의 staurosporine처리 후 세포 괴사 이미지를 측정하였다. Apoptosis를 위해서는 GFP를 발현시킬 수 있는 pCaspase3-sensor를 이용하였다 (nuclear translocation). Necrosis를 확인하기 위해서는 PI (propidium iodide)를 이용하였다. PI는 necrosis가 일어난 후 DNA와 결합하여 발광하는 형광 염색약이다. Apoptosis 관측 시 staurosporine 외 다른 인자들을 배제하기 위하여 세포 배양 조건은 DMEM (10% FBS, 100 IU/I PS) 배지와 5% 농도의 CO2를 지속적으로 공급하며, 37℃의 온도를 유지시킬 수 있는 세포 배양용 chamber를 이용하였다. Staurosporine을 처리 후 apoptosis가 일어나는 시간, 세포의 모습 및 GFP의 이동 현상을 관찰하였다. 이와 비교하기 위하여 cell viability (proliferation assay)를 측정하였다. 그 결과 0.7 μM staurosporine을 주입하였을 때 약 14시간 이후에 apoptosis가 관찰되었지만 모든 세포들이 apoptosis를 통하여 죽는 것이 아니고, necrosis를 통하여 죽는 것을 PI를 이용하여 관측하였다. Staurosprine의 농도를 0.1 μM로 감소 시켰을 경우에는 대부분의 세포들이 apoptosis로 죽는 것을 확인하였다. 결과적으로 세포가 staurosporine의 농도에 따라 서로 다른 메커니즘에 의해 괴사하는 것을 확인하였다. |
