| 학회 | 한국화학공학회 |
| 학술대회 | 1999년 봄 (04/23 ~ 04/24, 성균관대학교) |
| 권호 | 5권 1호, p.973 |
| 발표분야 | 생물화공 |
| 제목 | 재조합 대장균 배양에서 fusion partner로서의 green Fluorescent protein을 이용한 fusion 단백질의 발현 |
| 초록 | (His)6-GFP-EK-X의 motif로써 green fluorescent protein (GFP) fusion 단백질 발현을 위한 세가지의 재조합 플라스미드를 제작하였다.여기에서 X는 chloramphenicol acetyl-transferase (CAT), human interleukin-2 (hIL-2),그리고 organophosphorus hydrolase (OPH)를 나타낸다. 또한 (His)6는 분리정제를 위한histidine affinity ligand를 나타내며 EK는 fusion 단백질로부터 목적단백질을회수하기 위한 enterokinase cleavage site를 나타낸다.약 63kDa의 CAT fusion 단백질과 약 70kDa의 OPH fusion 단백질이 세포 파쇄후상등액에 4.85 mircogram/mL과 1.42 microgram/mL의 수준으로 발현되었으며GFP와 결합되었음에도 효소활성을 유지하였다.약 52kDa의 hIL-2 fusion 단백질의 경우는 GFP 형광이 매우 낮았고대부분의 fusion 단백질이 파쇄후 세포찌꺼지에 남았다.GFP 형광과 CAT 또는 OPH 농도 그리고 GFP 형광과 CAT 또는 OPH 효소활성 사이에선형의 관계를 나타냄으로써 GFP 형광강도만을 간단하게 측정함으로써목적단백질의 in vivo, non-invasive한 정량적 측정이 처음으로 가능하였다. |
| 저자 | 차형준, Chi-Fang Wu, William E. Bentley |
| 소속 | 메릴랜드대 |
| 키워드 | GFP; protein fusion; 재조합 플라스미드 |
| 원문파일 | 초록 보기 |
