| 초록 |
Bacillus subtilis 는 유전 정보가 많이 알려져 있고 성장속도가 빠르며 목적 단백질을세포 밖으로 분비하는 특성으로 인해 생산된 효소의 분리 및 정제에 소요되는 비용이 절감되어 다양한 효소 생산에 이용되고 있다. Cyclodextringlucanotransferase(CGTase)는 전분을 기질로 하여 포도당분자 6, 7 또는 8개가1, 4-glucosidic bond로 연결된 환형 구조의 α, β, γ-cyclodextrin(CD)을 생성한다. B.macerans 유래의 CGTase는 α-CD를 주로 생성하며, 산업적으로 이용가치가 높아 의약품,식품보조제, 살충제 등으로 사용된다. 본 연구에서는 CGTase발현 효율을 증대하기 위하여 재조합 B. subtilis 유가식 배양의 발효전략을 최적화였다.대수성장기중의 세포성장이 LB보다 FBd배지에서 빠르게 나타났다. CGTase생산은non-growth associated production의 형태로 나타나 발효 후반부에 효소 생산이 이루어졌다. 수용성전분을 feeding solution에 혼합한 경우가 두 종류의 배지에서 효소 발현이 높았는데 이는 전분이 CGTase발현량을 높이는데 효과가 있는 것으로 보인다. 전분으로 인한발현량 증가는 정지기가 시작되는 25시간부터 두드러지는데 이로인해 중간산물인 CDs는감소하게되고 올리고당의 증가가 나타나 발현량을 간접적으로 알 수 있으며 올리고당이CGTase 발현증가에 효과가 있는 것으로 추정된다. 가장 좋은 CGTase 발현은 definedmedium에서 14 U/ml 의 역가와 228U/L hr의 단위부피생산성으로 단순회분식배양에서보다 각각 4.8, 2.4배 증가되었다.
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