| 초록 |
Chitosan은 분자량 범위 10kDa, 100kDa, 500kDa이며, DNA는 pVR1255-luciferase(Vical)을 사용하였다. 각각의 chitosan을 DNA와 complexation시켜 나노 유전자 전달체를 형성하였고, complex의 크기는 dynamic light scattering를 통해 알아보았다. 그 크기는 100~300nm 였고, 분자량 500kDa의 chitosan이 complex 형성 시 낮은 N/P ratio에서도 크기가 고르고 작게 형성됨을 확인 하였다. 또한 Gel retardation을 통해서 분자량이 크고 N/P ratio가 클수록 complex가 잘 형성 되는 것을 확인하였다. HEK293 cell에서 Transfection 후 luciferase의 발광 정도를 통해서도 gel retardation과 같은 결과를 얻었다. Endosome release 실험과 Protection assay을 N/P=4에서 실험 한 결과 분자량 500kDa의 chitosan과 DNA complex가 가장 많은 DNA를 포접 하고, 보호하고 있음을 확인 하였다. Cell 내에서 chitosan과 DNA가 분리되는 정도와 위치를 시간별로 측정하기 위해 DNA을 Quantum Dots(Fort orange)으로 labeling 하였고, Texas Red로 chitosan을 labeling 하였다. Flow cytometry와 confocal laser scanning microscope 로 확인하였다. |
